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單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研

簡(jiǎn)要描述:

單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研的相關(guān)熱銷產(chǎn)品:CD34抗體
CD36抗體
鼠抗人CD4單克隆抗體

更新時(shí)間:2022-01-27

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單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研

產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

產(chǎn)品名稱:單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)試劑盒科研

規(guī)格:48樣 96樣

貨號(hào):AS062

檢測(cè)方法:紫外分光光度法 微板法

產(chǎn)品分類:ASA-GSH循環(huán)系列

貯存溫度:2~8℃。

本試劑盒保質(zhì)期:6個(gè)月。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。

試劑的組成和配制:

提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;

試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;

試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;

試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;

試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。23.png

 

所需的儀器和用品:

 

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水

四、超氧化物歧化酶(SOD)的測(cè)定:

建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個(gè)樣本做預(yù)測(cè)定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)

樣本和試劑浪費(fèi)!

1、樣本制備

① 組織樣本:

取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行

勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測(cè)液。

【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取

② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:

先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL

提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);

12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測(cè)。

【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10

4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測(cè);若渾濁,離心后取上清檢測(cè)。

Desmocollin 4  橋粒糖4抗體 規(guī)格: 0.2ml

Follistatin  卵泡抑抗體 規(guī)格: 0.1ml

ASB10  含錨重復(fù)序列-細(xì)胞因子信號(hào)抑制物盒家族10抗體 0.1mlGoat Anti-rabbit IgG/PE-CY5  PE-CY5標(biāo)記的羊抗兔IgG 規(guī)格: 0.1ml

SDCG1  清學(xué)定義結(jié)腸抗原1抗體 規(guī)格: 0.2mlPhospho-FGFR1 (Tyr766)  磷化性成纖維細(xì)胞生因子受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml

Phospho-p57 Kip2 (Thr310)  磷化周期依賴激抑制因子1C抗體 規(guī)格: 0.1ml

Mucin 4/Muc4  粘-4抗體 0.1ml

Rabbit Anti-Bovine IgM/Gold  膠體金標(biāo)記的兔抗牛IgM 規(guī)格: 2ml

CNTN4/AXCAM  軸突相關(guān)粘附分子抗體 規(guī)格: 0.2mlSalmonella enteritidis H  傷寒沙門氏菌鞭毛抗原H抗體 規(guī)格: 0.2ml

PKA regulatory subunit I beta  激受體相關(guān)1β抗體 規(guī)格: 0.2ml

phospho-PRKAA2(Ser173)  單磷活化激α2抗體 規(guī)格: 0.1mlMARCH1  膜相關(guān)環(huán)指1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Mouse Anti-Goat IgG/Bio  標(biāo)記的小鼠抗羊IgG 規(guī)格: 0.1ml

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操作步驟:

實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時(shí),均需混勻,混勻時(shí)盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測(cè)樣品含量,如樣品濃度過高時(shí),應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測(cè)范圍,計(jì)算時(shí)再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1.        加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測(cè)樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.        棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測(cè)溶液A工作液 100μl(在使用前一小時(shí)內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

4.        每孔加檢測(cè)溶液B工作液(同檢測(cè)A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5.        溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。

6.        依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時(shí)肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。

7.       依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.       用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測(cè)。

 


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